Bestämma våglängden för maximal absorption (λmax)

Våglängden för maximal absorbans (λmax) är en kritisk parameter för kvantitativ analys med spektrofotometri. Det är den specifika våglängd vid vilken ett ämne absorberar mest ljus, vilket ger den högsta känsligheten för mätning.

Förbered provlösning: Lös upp analyten av intresse i ett lämpligt lösningsmedel. Se till att koncentrationen ligger inom det linjära området för spektrofotometern, vilket vanligtvis ger en absorbans mellan 0,1 och 1,0.
Blindmätning: Fyll en kyvett med det rena lösningsmedlet som används för provet. Sätt in denna "blank" i spektrofotometern och använd den för att kalibrera instrumentet, ställ in absorbansen till noll över våglängdsområdet eller vid specifika punkter.
Utför spektralskanning: Placera provkyvetten i spektrofotometern. Programmera instrumentet att utföra en full spektral scan över ett relevant våglängdsområde. För många organiska molekyler är detta ofta det ultravioletta (UV) och synliga (Vis) spektrumet, vanligtvis från 200 nm till 800 nm.
Registrera absorbansdata: Spektrofotometern kommer att mäta och plotta absorbansvärdena vid olika våglängder, vilket genererar ett absorbansspektrumgraf.
Identifiera toppvåglängd (λmax): Undersök det genererade spektrumet. Våglängden som motsvarar den högsta punkten eller toppen på absorbanskurvan är våglängden för maximal absorbans (λmax).
Verifiera och dokumentera: För noggrannheten är det god praxis att upprepa skanningen eller bekräfta λmax med kända litteraturvärden för ämnet, om det finns tillgängligt. Dokumentera denna våglängd för framtida analytiska tillämpningar.

Våglängdsintervall och provöverväganden

Parameter	UV-Vis-spektrofotometri	Fluorescensspektrofotometri	Atomabsorptionsspektrometri (AAS)
Mätad egenskap	Absorbans	Emissionsintensitet	Absorbans (specifika atomlinjer)
Typiskt våglängdsområde	190-1100 nm	200-800 nm (excitation/emission)	Elementspecifik (t.ex. 200-850 nm)
Primärt provtillstånd	Lösningar, klara vätskor	Lösningar	Lösningar (nebuliserade till låga/ugn)
Behov av provberedning	Upplösning, utspädning	Upplösning, avgasning (vid behov)	Upplösning, matrismatchning